抗原特异性 CD4＋T 细胞克隆的建立的基本过程可分为如下几步：
1．分离获得 TIL、淋巴结细胞、PBMC 采用常规组织淋巴结分离方法如分离淋巴结后，100 目筛网研磨分离获得 TIL 或淋巴结，淋巴细胞分离液密度梯度离心法获得 PBMC。
2．加入 2～10 μg/ml 抗原，37 ℃、5% CO2 培养。1 周后，重复刺激 1 次。
3．用与抗原孵育过的、照射后或丝裂霉素 C 处理后 APC 刺激细胞，每 1～2 周刺激 1 次。
4．每次刺激后 1～2 天，加入 10～20 IU/ml IL-2。
5．稀释刺激后细胞，铺于 96 孔细胞培养板（0.3、1、3 或 10 个细胞/孔），加入 IL-2 和 APC 进行刺激。重复刺激 2 次后，进行细胞增殖检测。
6．用上述方法再次刺激阳性克隆，获得抗原特异性 CD4＋T 细胞克隆。
